Keywords：溶酶體，純化溶酶體組分，Tritosomes，SD大鼠肝tritosomes，Lysosomes，Tyloxapol（Triton WR 1339）臨床前藥物研發(fā)，ADC藥物，小核酸藥物，siRNA，ASO，Preclinical Drug Development;

隨著生物技術(shù)的快速發(fā)展，溶酶體（Lysosomes）在藥物研發(fā)中的重要作用日益凸顯，尤其是小核苷酸藥物及ADC藥物，溶酶體是該類藥物開發(fā)過程中必-不可-少的體外研究模型。因此，開發(fā)分離溶酶體的技術(shù)勢(shì)在必得。然而，溶酶體具有與線粒體非常相似的密度，傳統(tǒng)密度梯度離心法難以有效分離。Tyloxapol（Triton WR 1339）藥物的應(yīng)用通過選擇性降低溶酶體密度解決了這一難題，通過該種方法分離得到的溶酶體稱為Tritosomes。Tritosomes是一種特殊的純化和富集溶酶體組分，為溶酶體相關(guān)研究提供了更精準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)手段，尤其在藥物研發(fā)領(lǐng)域具有廣泛應(yīng)用價(jià)值。鑒于此，IPHASE作為體外研究生物試劑引-領(lǐng)者，成功研發(fā)SD大鼠肝Tritosomes，為客戶開展藥物研發(fā)等試驗(yàn)提供更多選擇。

01    Tritosomes介紹

Tritosomes是一種通過負(fù)載非離子型表面活性劑Tyloxapol（Triton WR-1339）制備的特殊溶酶體。通過向?qū)嶒?yàn)動(dòng)物（如大鼠）注射Tyloxapol（Triton WR-1339），該物質(zhì)會(huì)被肝細(xì)胞內(nèi)吞并聚集在溶酶體中。通過疏水作用嵌入溶酶體膜，與膜磷脂形成復(fù)合物，導(dǎo)致溶酶體脂質(zhì)組成改變。例如，處理后的溶酶體甘油三酯和膽固醇含量顯著增加，而膜脂流動(dòng)性提高。這種脂質(zhì)重構(gòu)直接降低了溶酶體的整體密度，使其從常規(guī)的1.18-1.21 g/mL降至1.08-1.13 g/mL，與線粒體（1.18-1.20 g/mL）的密度差異擴(kuò)大至可區(qū)分范圍。此外，Tyloxapol（Triton WR-1339）可能干擾溶酶體與其他細(xì)胞器（如吞噬體）的融合過程。例如，在吞噬實(shí)驗(yàn)中，結(jié)合Triton的溶酶體無法與含牛血清白蛋白的吞噬體融合，導(dǎo)致兩者在密度梯度中分離。這種 “隔離效應(yīng)" 進(jìn)一步確保溶酶體在密度梯度離心時(shí)形成獨(dú)立條帶。因此，結(jié)合了Tyloxapol的溶酶體被人們稱為Tritosomes，之后漸漸演變?yōu)榱搜芯考兓透患苊阁w時(shí)的常用技術(shù)。

Tritosomes保留了溶酶體的酸性水解酶活性（如組織蛋白酶、酸性磷酸酶），并且與傳統(tǒng)溶酶體分離方法相比，該純化體系得到的Tritosomes具有更高的純度（可去除90%以上的線粒體污染）和均一性，為研究人員提供了精準(zhǔn)的亞細(xì)胞系統(tǒng)，可排除其他細(xì)胞器的干擾，專門聚焦于影響藥物行為的溶酶體相關(guān)過程。

02    Tritosomes在臨床前藥物研發(fā)中的應(yīng)用

Tritosomes的核心應(yīng)用價(jià)值在于為科研人員深入解析藥物與溶酶體的相互作用機(jī)制提供關(guān)鍵支持。臨床前研究中，研究人員借助該制劑探究實(shí)驗(yàn)性化合物在溶酶體內(nèi)的截留程度，這一過程會(huì)直接影響藥物的組織分布特征與長(zhǎng)期蓄積水平，是評(píng)估藥物體內(nèi)行為的重要環(huán)節(jié)。此外，明確藥物被溶酶體攝取的具體機(jī)制，對(duì)于預(yù)測(cè)藥物相關(guān)不良反應(yīng)（如藥物誘導(dǎo)的磷脂沉積癥）同樣至關(guān)重要：此類不良反應(yīng)不僅會(huì)削弱藥物的臨床安全性，還可能導(dǎo)致其無法通過監(jiān)管機(jī)構(gòu)的上市審批，直接影響藥物研發(fā)進(jìn)程。

【Tritosomes與抗體偶聯(lián)藥物（ADC）研發(fā)】

抗體偶聯(lián)藥物（Antibody-Drug Conjugate，ADC）是通過連接子（Linker）將小分子細(xì)胞毒素（Paylaod）偶聯(lián)至靶向性抗體或抗體片段上的一類新型的生物技術(shù)藥物（圖1），可以增強(qiáng)藥物靶向性和穩(wěn)定性、減少臨床毒副反應(yīng)、提高治療指數(shù)，兼具傳統(tǒng)小分子藥物的殺傷效應(yīng)和抗體藥物的靶向性，主要應(yīng)用于抗腫瘤或者其他疾病的靶向治療。

圖1 ADC藥物的結(jié)構(gòu)和功能示意圖

來源：Antibody drug conjugate: the“biological missile" for targeted cancer therapy

在ADC藥物的研發(fā)過程中，Tritosomes作為替代研究模型，在探究細(xì)胞毒性藥物胞內(nèi)釋放機(jī)制中發(fā)揮關(guān)鍵作用。由于ADC需依賴溶酶體蛋白酶與水解酶完成兩大核心過程：切割連接子（linker）或降解抗體骨架，因此經(jīng)純化并富含溶酶體酶的Tritosomes可提供一個(gè)可靠且高效的體外研究平臺(tái)，為評(píng)估上述過程的效率及作用機(jī)制提供支持。

通過模擬體內(nèi)溶酶體降解微環(huán)境，Tritosomes能夠幫助研究人員厘清三項(xiàng)核心信息：不同連接子化學(xué)結(jié)構(gòu)的切割效率高低、載荷的釋放模式，以及物種特異性差異對(duì)藥物釋放過程的潛在影響。這一特性使tritosomes成為ADC研發(fā)中重要的模型：在推進(jìn)至體內(nèi)實(shí)驗(yàn)前，借助該模型評(píng)估ADC的穩(wěn)定性及代謝特性，不僅可顯著降低實(shí)驗(yàn)成本，還能為臨床前實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的篩選提供科學(xué)依據(jù)。

【Tritosomes與小核酸藥物研發(fā)】

小核酸藥物，又稱寡核苷酸藥物（Oligonucleotides, ONs），憑借其獨(dú)特的技術(shù)特點(diǎn)成為近年來新藥研發(fā)領(lǐng)域關(guān)注的焦點(diǎn)，是目前發(fā)展最-為迅猛的基因療法之一。小核酸藥物包括小干擾RNA（small interfering RNA, siRNA）、反義寡核苷酸（Antisense oligonucleotide，ASO）、微小RNA（microRNA, miRNA）、小激活RNA（small activating RNA, saRNA）、信使RNA（messenger RNA, mRNA）、核酸適配體（Aptamer）和抗體核酸偶聯(lián)藥物（Antibody-oligonucleotide conjugates, AOC）等。當(dāng)前研究的重點(diǎn)主要集中于siRNA、ASO和Aptamer這三種小核酸藥物上。小核酸藥物研究的核心挑戰(zhàn)在于：多數(shù)寡核苷酸會(huì)被內(nèi)體與溶酶體捕獲截留，一旦無法從這類細(xì)胞器中逃逸進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)，便會(huì)在其中快速降解，導(dǎo)致治療活性喪失。

在小核酸藥物研究領(lǐng)域，tritosomes的價(jià)值同樣突出。Tritosomes能夠提供一個(gè)可控的體外研究體系，專門用于探究未修飾及化學(xué)修飾小核酸藥物的降解動(dòng)力學(xué)規(guī)律。通過在該體系中對(duì)小核酸藥物開展測(cè)試，研究人員不僅能評(píng)估各類化學(xué)修飾抵御溶酶體核酸酶降解的能力強(qiáng)弱，還能驗(yàn)證旨在促進(jìn)內(nèi)體逃逸的遞送系統(tǒng)的實(shí)際效用。因此，tritosomes可作為 “生化應(yīng)激測(cè)試" 工具，在推進(jìn)至復(fù)雜動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)階段前，為小核酸藥物的穩(wěn)定性優(yōu)化及遞送策略改進(jìn)提供關(guān)鍵支持。

03    IPHASE相關(guān)產(chǎn)品

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綜上所述，采用Tyloxapol（Triton WR-1339）制備的tritosomes是一種純化和富集溶酶體組分，其研究是現(xiàn)代臨床前藥物研發(fā)體系中核心組成部分。借助肝tritosomes，科研人員能夠更精準(zhǔn)地開展三項(xiàng)關(guān)鍵研究工作：探究藥物的胞內(nèi)分布特征、評(píng)估藥物在溶酶體內(nèi)的穩(wěn)定性，以及分析藥物潛在的安全性風(fēng)險(xiǎn)。而隨著制藥行業(yè)愈發(fā)清晰地認(rèn)識(shí)到溶酶體通路對(duì)藥物療效與毒性的雙重重要性：二者直接決定藥物研發(fā)成敗，肝tritosomes也愈發(fā)彰顯其不可替代的工具屬性：其可有效銜接實(shí)驗(yàn)研究與療法的成功研發(fā)，成為推動(dòng)藥物從實(shí)驗(yàn)室研究邁向臨床應(yīng)用的關(guān)鍵橋梁。鑒于此，IPHASE作為體外研究生物試劑引-領(lǐng)者，憑借先-進(jìn)的設(shè)備、專業(yè)的技術(shù)人員和多年研發(fā)經(jīng)驗(yàn)，成功研發(fā)SD大鼠肝Tritosomes和ICR/CD-1小鼠肝Tritosomes，為客戶開展藥物研發(fā)等試驗(yàn)提供更多選擇。